*试剂的配制
    ·0.1mol/L CaCl2：1.1g 无水CaCl2溶于100ml ddH2O
    ·普通LB固体培养基制备：
    在LB液体培养基中加入琼脂至终浓度为1.5%，高压灭菌后倒入灭菌玻璃平皿中，待完全冷却凝固后，37℃放置6h后，4℃保存备用。
    ·选择性固体培养基制备：
    按上述普通固体培养基的配制方法配制并高压灭菌，冷却至50℃时加入抗生素，摇匀后按上述方法铺制平板。
    ·10mg/ml RNA酶：
    称取一定量的胰RNA酶A溶于10mmol/L Tris×Cl （pH7.5）、15mmol/L NaCl溶液中，配制成10mg/ml，于100℃加热15min，缓慢冷却至室温，分装，-20℃冻存备用。
    ·TE：10mmol/L Tris-HCl 1mmol/L EDTA，pH 8.0
    *操作步骤
    1)感受态细菌的制备
    ·挑单菌落接种于2ml LB培养基中，37℃振荡培养过夜(200转/分)；
    ·取20ml上述菌液接种于2mLB培养基中，继续置37℃振摇培养4 h，至OD600≈0.4~0.5 (220转/分)；
    ·取1ml菌液离心，12000rpm离心30s；
    · 去上清，加入200µl预冷的0.1mol/LCaCl2，悬浮细菌且混匀，冰浴30min。注意勿剧烈振摇试管，勿反复吹打细胞；
    ·将制备好的感受态细菌保存在30％甘油中，-70℃保存或直接用于转化反应。
    2）质粒DNA的转化
    · 取2个EP管，设立阴性对照和实验管
    阴性对照：
    感受态细胞 200ml
    pIG/3C —
    实验管：
    感受态细胞 200ml
    pIG/3C 50ng
    ·混匀，置冰上30min，42℃热休克90sec，迅速置冰上5min，
    ·加入不含抗生素的LB培养基800ml，37℃ 200rpm振摇1h，
    ·短暂离心，弃去一部分上清，剩余的100ml菌液全涂于含10mg/ml四环素和20mg/ml氨苄青霉素的LB琼脂平板，待液体吸干后，倒置于37℃培养箱孵育16～18hr，观察菌落的生成。
    3）质粒的快速小量制备
    *试剂的配制：
    ·溶液I
    EDTA 10mmol/L pH 8.0 Tris-HCI 50mmol/L pH 7.5
    ·溶液II
    NaOH 0.2mmol/L、SDS 1%，临时配制
    ·溶液III
    KAc 12.95g 溶于ddH2O中 冰醋酸调PH4.8定容至100 ml.
    ·3mol/L 乙酸钠 PH 5.2
    * 操作步骤
    ·挑取单菌落接种到3ml含10mg/ml四环素和20mg/ml氨苄青霉素的LB培养基中;
    ·37℃振摇培养过夜(12-16hr)，离心收集菌体;
    · 加入溶液100ml，混匀，室温放置5min；
    ·加200ml新鲜配制的溶液Ⅱ，颠倒混匀，冰浴5min；
    ·加溶液Ⅲ 150ml，混匀，冰浴10min;
    ·15000rpm离心5min;
    ·上清用酚/氯仿和氯仿各抽提一次;
    ·取上层水相加入2倍体积无水乙醇，静置5min;
    ·15000离心10min，弃上清，沉淀于室温干燥后，溶于20ml TE储存于-20℃备用。
    4）质粒限制性内切酶分析鉴定
    限制性内切酶酶切参照各酶的说明书进行。依次在EP管中加入
    灭菌双蒸水：15.8ml
    10×MULTI-CORE Buffer：2 ml
    Acetylated BSA（10m：