1.玻璃吸管和玻璃培养瓶的消毒:1)高压蒸汽灭菌15分钟以上;2)干烤消毒140度2小时以上;
    2.无菌工作台先清洗后用75%酒精擦拭干净紫外线照射40分钟以上;各种培养板照射3小时以上;
    3.培养基(pH7.2)和血清配制好后要做无菌试验:将血清按10%加入培养基内用无菌的玻璃离心管或玻璃瓶取完全培养基5-10ml置培养箱内培养2-3天肉眼见无浑浊或沉淀等异物.分装后置-20度保存;
    4.消化液(pH7.8)或其它加入液应用高压蒸汽灭菌或一次性无菌滤器过滤除菌分装成支置-20度保存;
    5.各种炒娴囊禾甯次率庇Ρ咭”呷诨?否则有的液体(特别是培养基)容易产生沉淀.
    6.培养箱应先用清水清洗后用75%酒精擦拭一遍(如有紫外线的应照射1小时以上如有高温灭菌的应按程序来菌).至少每月一次.
    7.进入操作时应注意先清洗双手及手腕然后用75%酒精擦拭操作时注意无菌台内空间层次.手及物品不要在暴露的瓶口上方来往如果数量较多培养瓶应放在与酒精灯平行地方便于操作瓶与瓶之间应相隔一定的距离开瓶(盖)时应先用75%酒精反复擦拭或用灯烧开开后应用灯先烧口然后烧盖.用完后同样操作.整个操作过程尽量在无菌台靠里面一点.
    复苏:
    1.应遵守慢冻快融的原则.先将水温锅调至37-37.5度取出冻存的细胞迅速放入后交细胞面浸至水面以下不断摇动至融化.
    2.在无菌台内将完全培养基加入50ml的小培养瓶内约5ml左右然后用无菌吸管从冻存管内取出细胞置培养并内轻轻摇晃使细胞均匀后置培养箱内培养.
    传代:
    1.贴壁细胞:
    对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基吸的越干净越好以免中和后加入的消化液使强度减弱.50ml培养瓶加入消化液约0.6ml按此比例进行消化(根据配制强度经验)晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2分钟镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后轻轻振动瓶底使细胞全部脱落加入2-3ml完全培养基后轻轻吹打使细胞基本成单个悬浮然后分置其它无菌培养瓶内加入完全培养基后继续培养或实验.
    2.悬浮细胞:
    一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内加入完全培养基继续培养如要高浓度可先离心500rpm5min后加入完全培养基轻轻吹匀后分置其它培养瓶内加入完全培养基继续培养.